實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

產(chǎn)品屬性：  

商品介紹：

冷凍保存細胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大鼠P53(P53)免疫試劑盒*直銷

大鼠金屬硫蛋白2(MT-2)免疫試劑盒進口、分裝

大鼠載脂蛋白A1前體(Pre-Apo-A1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

雞抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

猴25羥基D3(25 HVD3)免疫試劑盒進口、分裝

犬促卵泡素(FSH)免疫試劑盒進口、分裝

兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒進口、組裝

REST協(xié)阻抑因子3(RCOR3)免疫試劑盒*直銷

抗弓形體(tox)抗體(IgG)免疫試劑盒*直銷

山羊骨形成蛋白2(BMP-2)免疫試劑盒*直銷

RF/6A (猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞)葡萄糖發(fā)酵管  20支

2 ug pMSCV-puro pMSCV-puro 低溫運輸，-20℃保存

mCPC培養(yǎng)基 mCPC Medium 250g

25g L- 鹽酸鹽 L-Histidine HCl    室溫干燥保存

50T 空腸彎曲菌PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

500 mL IMDM培養(yǎng)基（含1%雙抗+10%小牛血清） Cell Culture Medium -20℃保存

500mL Acrylamide Solution（丙烯酰胺溶液），40% Acrylamide Solution，40% 常溫保存