細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

產(chǎn)品介紹

HPAC細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持HPAC細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含 HPAC細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于HPAC 細(xì)胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分

DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基                      470 ml

特級(jí)胎牛血清                                     25 ml

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；?

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豚鼠白介素8(IL-8)試劑盒 ，英文名： IL-8 ELISA Kit

Two adenosine monophosphate (ADP) ELISA Kit 人二0酸腺苷(ADP)試劑盒

rabbitSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit 兔子S100B蛋白(S-100B)pcr檢測(cè)試劑盒分裝

CLIAKitforBeta-EPRELISAKit大鼠β內(nèi)啡肽受體

細(xì)菌血液瓊脂平板50個(gè)

RabbitHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit兔熱休克蛋白20(HSP-20)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人真胰島素(TI)ELISA 試劑盒

Human tumor necrosis factor alpha conveing enzyme (TACE) ELISA Kit 人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶(TACE)試劑盒

Humanproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISAKit 人抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)pcr檢測(cè)試劑盒分裝

HumanImmunoreactivegrowthhormone,irGH試劑盒人免疫反應(yīng)性生長(zhǎng)激素(irGH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-14)活性熒光定量試劑盒20次(10樣本)

HumanleukocyteaigenA，HLA-AELISAKit人類白細(xì)胞抗原A(HLA-A)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人脂蛋白a試劑盒   人脂蛋白a試劑盒      人脂蛋白a試劑盒，，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂蛋白a試劑盒、人脂蛋白a 試劑盒

人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒   人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒      人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒，，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒、人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒

人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子試劑盒   人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子試劑盒      人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子試劑盒，，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子試劑盒、人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子試劑盒

人整合素連接激酶1試劑盒   人整合素連接激酶1試劑盒      人整合素連接激酶1試劑盒，，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人整合素連接激酶1試劑盒、人整合素連接激酶1 試劑盒

促黃體生成素受體抗體

鳥苷酸環(huán)化酶α2/GCS-α-2抗體

EPHA4重組食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

Melamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白

FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

ING4 Protein Human 重組人 ING4 蛋白

EPO Protein Mouse 重組小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

HPAC 細(xì)胞專用培養(yǎng)基Melamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶聯(lián)牛血清白蛋白

ING4 Protein Human 重組人 ING4 蛋白

EPHA4重組食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

EPO Protein Mouse 重組小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein