小鼠原代椎體終板軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基

小鼠原代椎體終板軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持小鼠原代椎體終板軟骨細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含小鼠原代椎體終板軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無(wú)需添加任何成分，可直接用于小鼠原代椎體終板軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，寫(xiě)上細(xì)胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

S轉(zhuǎn)移酶κ1(GSTκ1)重組蛋白 Recombinant Glutathione S Transferase Kappa 1 (GSTk1)

CA4 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CSNK2A1重組小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 Protein

ERBB3 Protein Rhesus 重組恒河猴 HER3 / ErbB3 蛋白

PLBD2重組人 PLBD2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

大鼠鉤端IgG(Lep IgG)試劑盒 ，英文名： Lep IgG ELISA Kit

Rabbit epidermal growth factor (EGF) ELISA Kit 兔子表皮生長(zhǎng)因子(EGF)試劑盒

沙門(mén)氏菌(Spp)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>) 48T

CLIAKitforMHC(Humanmyosinheavychain)ELISAKit人肌球蛋白重鏈

體液鎂離子(Mg)濃度酶反應(yīng)光譜法定量試劑盒20次

ELISAKitZn-MT牛鋅金屬硫蛋白

異育銀鯽趨化因子CCL5   英文名稱：   Freshwater fish Chemokine C-C motif ligand 5   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   CCL-5

異育銀鯽免疫球蛋白D   英文名稱：   Freshwater fish Immunoglobulin D   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   IgD

異育銀鯽免疫球蛋白M   英文名稱：   Freshwater fish Immunoglobulin M   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   IgM

異育銀鯽白細(xì)胞間介素22   英文名稱：   Freshwater fish Ierleukin 22   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   IL-22

魚(yú)二(MDA)ELISA 試劑盒

Human ai septolysin O/ ai O (ASO) ELISA Kit 人抗鏈球菌溶血素O/抗O(ASO)試劑盒

HumanVitaminE,VEEELISAKit 人E(VE)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforADH/VP/AVP(Humanaidiuretichormone/vasopressin/argininevasopressin)ELISAKit人抗利尿激素/血管加壓素/精加壓素

血液焦0酸異構(gòu)酶(isopeenylpyrophosphateisomerase)活性比色法定量試劑盒20次

MousereceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISAKit小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)試劑盒

AF750標(biāo)記的調(diào)控胚胎干細(xì)胞分化蛋白Lhx2抗體

自噬相關(guān)蛋白4A抗體

小鼠原代椎體終板軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基HA重組甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

P-selectin P選擇素抗原 0.5mgP-selectin P選擇素抗原

ICAM3重組人 CD50 / ICAM-3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CA4 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 (His 標(biāo)簽)

EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白

?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌、無(wú)污染，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌、真菌等污染檢測(cè)。